Иммуноферментный анализ (ИФА)
Иммуноферментный анализ (ИФА) — метод лабораторной диагностики, позволяющий обнаруживать специфические антитела и антигены при самых разных инфекциях.
Метод основан на реакции «антиген-антитело», который позволяет выявить иммуноглобулины разных классов и другие вещества белковой природы (в том числе ферменты, токсины, фрагменты бактерий, а также антибиотики). Основной биоматериал для проведения ИФА — это сыворотка крови, либо другой биоматериал, например, пищевые продукты.
В иммуноферментном анализе следующие этапы:
- Лунки микропланшета покрыты очищенным антигеном. В лунки вносится биоматериал и контрольные образцы. Если присутствуют антитела, то образуется иммунный комплекс.
- Не связавшиеся антитела удаляют с помощью промывки специальным раствором.
- После промывки в лунки вноситься конъюгат, меченный пероксидазой хрена.
- После отмывки микропланшета, в лунки добавляют субстратный раствор.
- Реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент.
Полученная окраска зависит от количества специфических антител, присутствующих в пробе: при наличии антител раствор имеет синий цвет, который становится желтым после добавления стоп-реагента, при отсутствии антител раствор не окрашивается. Далее на фотометре определяется оптическая плотность. По формулам в автоматическом режиме вычисляется титр антител в каждой пробе.
Как проводят ИФА в лаборатории:
- Внесение сыворотки в лунки микропланшета
- Отмывки и последовательное внесение в лунки реагентов
- Измерение оптической плотности и валидация исследования врачом