Классический бактериологический метод с применением MALDI-TOF MS
В лаборатории используется методика высокоэффективного культивирования. Первым этапом проводится посев биоматериала на питательные среды. Питательная среда — это многокомпонентная субстанция, обеспечивающая рост бактерий за счет питательных веществ, витаминов, сыворотки и др.
Питательные среды очень разнообразны: жидкие и плотные, селективные, подходящие для конкретных видов бактерий или грибов, и универсальные, а также хромогенные и высокопитательные для прихотливых микроорганизмов.
После посева чашки убирают в термостат. Температура роста большинства клинически значимых бактерий +37˚ С. Для роста некоторых бактерий требуется повышенное содержание углекислого газа (для них используется СО2 инкубатор), а некоторые нуждаются в бескислородных (анаэробных) условиях. Чашки Петри инкубируются около 18-20 часов до просмотра их врачом. Для роста некоторых бактерий требуется более 48 часов.
Следующий этап - просмотр выросших колоний бактерий и их идентификация. Идентификация — это определение рода и вида микроорганизма. Самый современный и точный метод идентификации - это MALDI-TOF - масс-спектрометрия. Этот метод основан на определении спектра рибосомальных белков, которые специфичны для каждого вида микроорганизма. Сначала проводится подготовка слайда: на каждую точку слайда наносится культура бактерии или гриба, далее - капля матрикса, затем слайд высушивается на воздухе. Готовый слайд регистрируется и помещается в прибор для считывания. Прибор «читает» слайд путем обстрела лазером, а результат идентификации (т.е. «имя и фамилию» микроба) мы сразу же видим в программе масс-спектрометра.
После того, как идентифицирован вид микроорганизма, переходим к определению его чувствительности к антибактериальным препаратам. Это очень важно для лечения. Определять чувствительность можно несколькими методами: диско-диффузионным, автоматизированным методом по брейк-поинт, а также методом серийных разведений. Для постановки чувствительности используются специальная среда и диски, пропитанные определенными антибиотиками. Для учета результатов диско-диффузионного метода используются приборы, которые фотографируют чашку, замеряют зоны подавления роста у каждого антибиотика, и передают результаты в систему. Оценку чувствительности проводят по критериям CLSI, VET06.2017 1th ed, VET08.2018 4th ed; EUCAST v 11.0 01.2021.
Как выделяют микроорганизмы в лаборатории:
- Автоматизированный посев биоматериала на комплекс качественных питательных сред
- Инкубирование в условиях, необходимых для самых прихотливых микроорганизмов (в т.ч. анаэробиоз)
- Визуализация выросших колоний микроорганизмов
- Технология MALDI-TOF масс-спектрометрии позволяет быстро и точно идентифицировать большое количество бактерий и грибов до видового уровня
- Определение чувствительности к антибиотикам происходит валидированным методом