Полимеразная цепная реакция (ПЦР в реальном времени)
Метод ПЦР (полимеразной цепной реакции) используется в лабораториях давно и широко. С его помощью определяются возбудители кишечных, урогенитальных и других инфекций. Каждая пробирка с пробой, поступающая в лабораторию на исследование, проходит через ряд анализаторов
Микроорганизмы, как и все живые существа, имеют собственную генетическую информацию, хранящуюся в РНК (рибонуклеиновой кислоте) или ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоте). Если в пробе биоматериала есть возбудитель инфекции, то ПЦР увеличивает количество его РНК или ДНК, содержащуюся в пробе, во много-много раз и ее становится возможно детектировать.
Первый этап ПЦР - пробоподготовка. Она нужна для «сложных» биоматериалов: молока, патологического материала, пищевых продуктов и др. Вторым этапом нужно провести выделение нуклеиновой кислоты, это возможно как автоматизированным способом с помощью процессора магнитных частиц, так и ручным способом. Этот процесс состоит из лизиса, отмывок и заканчивается элюцией нуклеиновой кислоты в раствор. Полученная «чистая» нуклеиновая кислота готова к дальнейшему этапу. Далее выделенная проба раскапывается в пробирки с реакционной смесью, добавляется фермент и, если необходимо, минеральное масло, центрифугируется. Затем микропробирки загружаются в прибор - амплификатор и, в среднем, через полтора часа результат готов. Пробы, где результат положительный, дают подъем графиков. Отрицательный результат показывает, что нуклеиновой кислоты в биологическом материале нет и этот график будет идти горизонтальной линией – ведь накапливаться нечему.
График ПЦР имеет такой вид:
Как проводят ПЦР в лаборатории:
- Пробоподготовка и выделение нуклеиновых кислот
- Приготовление реакционной смеси и амплификация в приборе
- Валидация исследования врачом